martes, 19 de junio de 2012

Prácticos de Proteínas


PROTEÍNAS I: Ensayo de reconocimiento de proteínas

Objetivo de la práctica:
Reconocer la naturaleza proteica de sustancias como: caseína, gelatina, ovoalbúmina, asparto, glicina y suero de la leche. Para ello realizaremos los ensayos de biuret y xantoproteico con las distintas sustancias mencionadas anteriormente.

Materiales y sustancias a utilizar:

- Vaso de bohemia          - Leche descremada
- Soporte                         - Ácido etanóico 2.0 M
- Tela metálica                - Hidróxido de sodio al 10%
- Gradilla                        - Sulfato cúprico al 1%
- Tubos de ensayos         -Ácido nítrico concentrado
- Termómetro                  - Mechero
 - Papel de filtro             
- Varilla de vidrio


Fundamento de los ensayos de caracterización

El ensayo de Biuret  detecta la presencia de proteínas,  y de enlaces peptídicos. 
El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (de NaOH o KOH). En es caso utilizaremos NaOH



¿Cómo se da la reacción?

La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos.








Da positiva esta reacción en todos los compuestos que tengan dos o  más enlaces peptídicos consecutivos en sus moléculas.  (Reacción de color violeta)





Reacción de xantoproteico 



La reacción xantoproteica detecta la  cantidad de proteína soluble en una solución, Empleando ácido nítrico concentrado la prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina, y  la solución se torna de un color amarillo oscuro.



¿Cómo se da la reacción?



Esta reacción es característica de los grupos fenilo en la molécula proteica. Para esta prueba se produce la nitración del anillo bencénico presente en los aminoácidos obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo,







Procedimiento de la práctica:

Comencemos por la extracción de la caseína en la leche.
-Colocamos aproximadamente 25 ml de leche descremada en un vaso de bohemia.
-La calentamos hasta aproximadamente 40ºC  agitándola con varilla de vidrio.
-Agregarle ácido etanoíco 2.0M (gota a gota)  agitando hasta coagulación total.
-Separar el coagulo de caseína del suero de la leche mediante filtración. Luego con un papel de filtro secamos la caseína y colocamos en dos tubos de ensayo.

Continuamos con la caracterización:

a)En uno de los tubos realizamos la reacción de biuret. Le agregamos sobre la caseína 20 gotas de NaOh al 20% y 2 gotas de CuSo4  al 1%

b) en el segundo tubo realizamos la reacción xantoprotica. Le agregamos sobre la caseína 10 gotas de HNO3 concentrado.

También realizaremos el procedimiento de caracterización  para las muestra de ovoalbúmina, gelatina, asparto, glicina y en el suero de la leche.



Resultados

Muestra
Biuret
HNO3 (conc)
Caseína
Positivo
positivo
Ovoalbúmina
positivo
positivo
Gelatina
positivo
negativo
asparto
negativo
negativo
Glicina
negativo
negativo
Suero de leche
positivo
positivo



CONCLUSIONES

En la caseína el ensayo de biuret nos da una muestra de color violeta, por lo tanto podemos decir que existen enlaces peptídico y por tanto proteína. Para el ensayo xantoproteico nos da una muestra de tono amarillo (positivo) por lo tanto contiene aminoácidos con restos aromáticos.

Para el ensayo de biuret en ovoalúmina nos da positivo (color violeta) justamente la proteína de la clara de huevo es la ovoalúmina. Para el ensayo xantoproteico se observó una muestra espumosa y de color amarillo esto significa que tiene restos aromáticos.

Para el ensayo de biuret en gelatina nos da positivo esto significa que presenta proteínas de dos o más enlaces peptídico. Para el ensayo de xantoproteico nos da negativo, no hay restos aromáticos.

El ensayo de biuret para la glicina nos dio una solución de color azul, por lo tanto no hay presencia de proteína. Para el ensayo  xantoproteico nos dio tambien negativo no hay restos aromáticos

En el ensayo de biuret para asparto nos da una solución de color celeste por lo tanto no hay evidencia de enlaces peptídico. El ensayo xantoproteico dio negativo, tampoco hay restos aromáticos.

En el ensayo de biuret y xantoproteico para el suero de leche nos dan los dos positivos esto significa que hay enlaces peptídico y restos aromáticos.

  



Proteínas II Diálisis

En este práctico se pretende demostrar que a través de diálisis  el NaCl es capas de atravesar libremente la membrana semipermeable, mientras que las proteínas no la atraviesan.


Materiales a utilizar

-Dializador
-Vaso de bohemia
-Gelatina en solución
-NaCl
-AgNO3  (Nitrato de plata)
-NaOH al 10%
-CuSo4 al 1%



Reacción de  nitrato de plata



AgNO3           (Ag +) + (NO3-)  (ac)
         Catión Plata     Anión Nitrato

NaCl          (Na+) + (Cl-) (ac)
          Catión  Sodio  Anión Cloruro

Después  (Ag+) (ac) + (Cl-)  (ac)      AgCl (s)
                                           Cloruro de Plata

El cloruro de plata da un precipitado blanco, si esto pasa el resultado da positivo



¿Cómo se lleva al cavo?

-En el dializado prefabricado con un fondo de papel celofán que simula ser la membrana semipermeable, se coloco la solución acuosa a dializar (-la gelatina (proteína) y el cloruro de sodio.)
-El dializador se introdujo dentro de un vaso de bohemia con agua destilada.
-Tomamos muestras y las testeamos en busca de sales y proteínas con los ensayo de biuret y AgNo3

- se dejó reposar unos 15 minutos (aprox.)

- Tomamos nuevamente pequeñas muestras del interior y exterior del dializador y realizamos los ensayos de biuret y AgNo3


Resultados obtenidos:

Antes de diálisis

Muestra
Biuret
AgNo3

Interior
(+)
(+)
Exterior
(-)
(-)


Después de realizada la diálisis

Muestra
Biuret
AgNo3

Interior
(+)

Exterior
(-)
(+)


Conclusiones:

El ensayo con AgNo3 de la muestra obtenida del agua del exterior del dializador dio positivo esto demuestra la presencia de cloruro de sodio, siendo que antes no la había (dio negativo).
El ensayo de biuret dio negativo lo cual demuestra que no hay proteínas en el agua de exterior del dializador, con estos resultados llegamos al objetivo de la practica  demostramos que a través de diálisis  el NaCl es capas de atravesar libremente la membrana semipermeable, mientras que las proteínas no la atraviesan.



Creado por: Yamila Nuñez, Lucía Castro. Dahiana Tito. 6ºCB1





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