PROTEÍNAS I: Ensayo de reconocimiento
de proteínas
Objetivo de
la práctica:
Reconocer
la naturaleza proteica de sustancias como: caseína, gelatina, ovoalbúmina,
asparto, glicina y suero de la leche. Para ello realizaremos los ensayos de
biuret y xantoproteico con las distintas sustancias mencionadas anteriormente.
Materiales
y sustancias a utilizar:
- Vaso de
bohemia - Leche descremada
- Soporte - Ácido etanóico 2.0 M
- Tela metálica -
Hidróxido de sodio al 10%
- Gradilla - Sulfato cúprico al 1%
- Tubos de
ensayos -Ácido nítrico concentrado
- Termómetro - Mechero
- Papel de filtro
- Varilla de vidrio
- Varilla de vidrio
Fundamento
de los ensayos de caracterización
El ensayo
de Biuret detecta la presencia de proteínas, y de enlaces
peptídicos.
El reactivo
de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (de NaOH o KOH). En
es caso utilizaremos NaOH
¿Cómo se da la reacción?
La reacción se basa en la formación de un compuesto de color
violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones
Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de
los enlaces peptídicos.
Da positiva esta reacción en todos los compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos consecutivos en sus moléculas. (Reacción de color violeta)
Reacción de xantoproteico
La reacción xantoproteica detecta la cantidad de proteína soluble en una solución, Empleando ácido nítrico concentrado la prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina, y la solución se torna de un color amarillo oscuro.
¿Cómo se da la reacción?
Esta reacción es característica de los grupos fenilo en la molécula proteica. Para esta prueba se produce la nitración del anillo bencénico presente en los aminoácidos obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo,
Procedimiento de la práctica:
Comencemos por la extracción de la caseína en la leche.
-Colocamos aproximadamente 25 ml de leche descremada en un
vaso de bohemia.
-La calentamos hasta aproximadamente 40ºC
agitándola con varilla de vidrio.
-Agregarle ácido etanoíco 2.0M (gota a gota) agitando
hasta coagulación total.
-Separar el coagulo de caseína del suero de la leche
mediante filtración. Luego con un papel de filtro secamos la caseína y
colocamos en dos tubos de ensayo.
Continuamos con la caracterización:
a)En uno de los tubos realizamos la reacción de biuret. Le
agregamos sobre la caseína 20 gotas de NaOh al 20% y 2 gotas de CuSo4 al
1%
b) en el segundo tubo realizamos la reacción xantoprotica.
Le agregamos sobre la caseína 10 gotas de HNO3 concentrado.
También realizaremos el procedimiento de
caracterización para las muestra de ovoalbúmina, gelatina, asparto,
glicina y en el suero de la leche.
Resultados
Muestra
|
Biuret
|
HNO3
(conc)
|
Caseína
|
Positivo
|
positivo
|
Ovoalbúmina
|
positivo
|
positivo
|
Gelatina
|
positivo
|
negativo
|
asparto
|
negativo
|
negativo
|
Glicina
|
negativo
|
negativo
|
Suero de
leche
|
positivo
|
positivo
|
CONCLUSIONES
En la caseína
el ensayo de biuret nos da una muestra de color violeta, por lo tanto podemos
decir que existen enlaces peptídico y por tanto proteína. Para el ensayo
xantoproteico nos da una muestra de tono amarillo (positivo) por lo tanto
contiene aminoácidos con restos aromáticos.
Para el
ensayo de biuret en ovoalúmina nos da positivo (color violeta) justamente la
proteína de la clara de huevo es la ovoalúmina. Para el ensayo xantoproteico se
observó una muestra espumosa y de color amarillo esto significa que tiene
restos aromáticos.
Para el
ensayo de biuret en gelatina nos da positivo esto significa que presenta proteínas
de dos o más enlaces peptídico. Para el ensayo de xantoproteico nos da
negativo, no hay restos aromáticos.
El ensayo
de biuret para la glicina nos dio una solución de color azul, por lo tanto no
hay presencia de proteína. Para el ensayo xantoproteico nos dio tambien negativo no hay
restos aromáticos
En el
ensayo de biuret para asparto nos da una solución de color celeste por lo tanto
no hay evidencia de enlaces peptídico. El ensayo xantoproteico dio negativo,
tampoco hay restos aromáticos.
En el
ensayo de biuret y xantoproteico para el suero de leche nos dan los dos
positivos esto significa que hay enlaces peptídico y restos aromáticos.
Proteínas
II Diálisis
En este práctico
se pretende demostrar que a través de diálisis
el NaCl es capas de atravesar libremente la membrana semipermeable,
mientras que las proteínas no la atraviesan.
Materiales
a utilizar
-Dializador
-Vaso de
bohemia
-Gelatina
en solución
-NaCl
-AgNO3 (Nitrato de plata)
-NaOH al
10%
-CuSo4 al
1%
Reacción de
nitrato de plata
AgNO3 (Ag +) +
(NO3-) (ac)
Catión
Plata Anión Nitrato
NaCl (Na+) + (Cl-) (ac)
Catión Sodio
Anión Cloruro
Después (Ag+) (ac) +
(Cl-) (ac) AgCl (s)
Cloruro
de Plata
El cloruro de plata da un precipitado blanco, si esto pasa
el resultado da positivo
¿Cómo se
lleva al cavo?
-En el dializado
prefabricado con un fondo de papel celofán que simula ser la membrana semipermeable,
se coloco la solución acuosa a dializar (-la gelatina (proteína) y el cloruro
de sodio.)
-El dializador
se introdujo dentro de un vaso de bohemia con agua destilada.
-Tomamos
muestras y las testeamos en busca de sales y proteínas con los ensayo de biuret
y AgNo3
- se dejó
reposar unos 15 minutos (aprox.)
- Tomamos nuevamente
pequeñas muestras del interior y exterior del dializador y realizamos los
ensayos de biuret y AgNo3
Resultados
obtenidos:
Antes de diálisis
Muestra
|
Biuret
|
AgNo3
|
Interior
|
(+)
|
(+)
|
Exterior
|
(-)
|
(-)
|
Después de
realizada la diálisis
Muestra
|
Biuret
|
AgNo3
|
Interior
|
(+)
|
|
Exterior
|
(-)
|
(+)
|
Conclusiones:
El ensayo
con AgNo3 de la muestra obtenida del agua del exterior del dializador dio
positivo esto demuestra la presencia de cloruro de sodio, siendo que antes no
la había (dio negativo).
El ensayo
de biuret dio negativo lo cual demuestra que no hay proteínas en el agua de
exterior del dializador, con estos resultados llegamos al objetivo de la
practica demostramos que a través de
diálisis el NaCl es capas de atravesar
libremente la membrana semipermeable, mientras que las proteínas no la
atraviesan.
Creado por: Yamila Nuñez, Lucía Castro. Dahiana Tito. 6ºCB1
